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技術(shù)文章/ article

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艾滋病病毒(HIV)ELISA檢測試劑盒 使用說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2024-04-09      瀏覽次數:356

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被抗人類(lèi)免疫缺陷病毒微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測,經(jīng)過(guò)溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中艾滋病病毒(HIV)的存在與否。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  預處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?/span>50μL加樣即可。

4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱(chēng)

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

無(wú)

陰性對照

0.5mL

0.5mL

無(wú)

陽(yáng)性對照

0.5mL

0.5mL

無(wú)

檢測抗-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

 

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置陰、陽(yáng)性對照孔和樣本孔,陰、陽(yáng)性對照孔中加入陰性對照、陽(yáng)性對照各50μL;

3.  待測樣本孔加待測樣本50μL;

4.  隨后陰、陽(yáng)性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

結果判斷

 1.  試驗有效性:陽(yáng)性對照孔OD值平均值≥1.00;

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽(yáng)性

試劑盒性能

1.  準確性:陽(yáng)性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說(shuō)明試驗結果有效。

2.  特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

3.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

5.  有效期:6個(gè)月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗者承擔,本公司概不負責。

2.   嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作,實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作,后果由實(shí)驗者承擔。

 

 


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